Participación de la clínica B en la maduración de ovocitos de cerdo in vitro Público Deposited
Los ovocitos de los mamíferos quedan detenidos en la profase de la primera división meiótica durante la gestación. El reinicio de la meiosis ocurre después de la pubertad y es desencadenado antes de la ovulación por señales hormonales que actúan sobre las células foliculares que rodean al ovocito y lo inducen al avance de la meiosis hasta la metafase 11. En este proceso de maduración actúa de manera hndamental un complejo protéico conocido como Factor Promotor de la Maduración (FPM), que puede ser "transplantado" de ovocitos en maduración a ovocitos inmaduros, e inducir en éstos el reinicio de la meiosis. El FPM está Constituido por una cinasa, p34cdc2, cuyos niveles permanecen constantes a lo largo del ciclo celular, y una proteína reguladora, ciclina B, cuya concentración es variable, alcanza su máximo durante la división celular y modula de este modo los niveles de actividad del factor. El FPM produce la fosforilación directa o indirecta de diversas proteínas relacionadas con la división celular y su participación en la maduración del ovocito ha sido ampliamente estudiada en almejas, estrellas de mar y anfibios, mientras que en los mamíferos su caracterización se limita a algunas especies de roedores y bovinos, y a células somáticas humanas. Restan por aclarar muchos puntos acerca de la participación de sus componentes durante el proceso de maduración de ovocitos de mamífero. En este trabajo se muestra la participación de la ciclina B en la maduración in vitro de ovocitos de cerdo. Para madurar, los ovocitos extraídos de ovarios de cerdas recién sacrificadas se colocaron en medio 199 suplementado con FSH, LH y estradiol por 24 o 48 h. La maduración, medida por el rompimiento de la vesícula germinal, se detectó a las 36 h en el 30% de los ovocitos, por 10 que se considera que a las 24 h los ovocitos son inmaduros, mientras que a las 48 h se presenta un alto porcentaje de ovocitos maduros. Por medio de la técnica de Dot Blot, empleando un anticuerpo anti-ciclina B humana que reconoce una secuencia altamente conservada en todas las especies estudiadas a la fecha, se detectó una proteína homóloga a la ciclina B en extractos crudos de ovocitos de cerdo. La concentración de esta proteína parece aumentar entre las 24 y 48 h de maduración. Durante el proceso de maduración in vitro del ovocito, se observó un cambio en la localización intracelular de la ciclina. En los ovocitos inmaduros a las 24 h, la señal inmunofluorescente se detectó de forma difüsa en todo el citoplasma, mientras que en los maduros, después de las 48 h, la inmunofluorescencia se encontró asociada exclusivamente a la cromatina, ya sea en forma de vesícula germinal o de cromosomas metafásicos condensados. Los cambios de localización que presenta esta proteína son semejantes a los reportados para las células somáticas en división de otras especies. Estos cambios podrían dar como resultado una fosforilación diferencial de los sustratos del FPM y pueden estar asociados a los fenómenos que ocurren durante la maduración in vitro de los ovocitos de cerdo.
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