Análisis del promotor de romo 1 y su evaluación en respuesta a la sobrecarga de colesterol en un modelo de carcinoma hepatocelular Público Deposited
Introducción: El carcinoma hepatocelular es el principal cáncer primario de hígado a nivel mundial, y su progresión y agresividad están relacionados con la ingesta de una dieta alta en colesterol. ROMO1 es un modulador de ROS que se encuentra en la membrana interna de las mitocondrias, y su sobreexpresión se ha relacionado con mal pronóstico en pacientes con HCC, por lo que este proyecto se enfoca en estudiar si romo1 está afectado por el colesterol, esto a nivel transcripcional, y si es así, determinar cuál o cuales son los posibles factores de transcripción que están involucrados. Metodología: En un modelo de sobrecarga de colesterol en la línea celular Huh7, se realizaron experimentos de RT-qPCR, análisis In Silico, WB, cuantificación de superóxido mitocondrial por MitoSOXRed y ensayo de gen reportero (mCherry) para evaluar la respuesta a nivel transcripcional, y funcional de ROMO1. Resultados: El colesterol aumento la expresión de ROMO1 sólo a nivel transcripcional y no de proteína, pero se encontró un aumento la producción de superóxido mitodocondrial. El ensayo de gen reportero demostró que la región que regula a ROMO1 se encuentra entre la base -2000 y -4000 upstrem del promotor (extremo 5´). Conclusión: La sobrecarga de colesterol induce la expresión del gen romo1, provocando un incremento de superóxido mitocondrial que pueden activar rutas involucradas en la proliferación y resistencia a apoptosis, encontrando una región importante del promotor en su regulación transcripcional.
Introduction: Hepatocellular carcinoma is the main primary liver cancer worldwide, and its progression and aggressiveness are related to the intake of a high cholesterol diet. ROMO1 is a ROS modulator found in the inner membrane of mitochondria, and its overexpression has been linked to poor prognosis in patients with HCC, so this project focuses on studying whether romo1 is affected by cholesterol, at the transcriptional level, and if so, determining which are the possible transcription factors that are involved. Methods: In a cholesterol overload model in the Huh7 cell line, RT-qPCR experiments, In Silico analysis, WB, quantification of mitochondrial superoxide by MitoSOXRed and reporter gene assay (mCherry) were performed to evaluate the response at the transcriptional and functional level of ROMO1. Results: Cholesterol increased ROMO1 expression only at the transcriptional level and not at the protein level, but an increase in mitochondrial superoxide production was found. The reporter gene assay showed that the region that regulates ROMO1 is located between the -2000 and -4000 base upstream of the promoter (5' end). Conclusion: Cholesterol overload induces the expression of the romo1 gene, causing an increase in mitochondrial superoxide that can activate pathways involved in proliferation and resistance to apoptosis, finding an important region of the promoter in its transcriptional regulation.
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