Desarrollo y caracterización de un modelo de unión neuromuscular empleando técnicas de co cultivos celulares Pubblico Deposited
The aim of this work is to implement a neuromuscular model for the characterization of the neuromuscular junctions in cellular co cultures, trying to establish the mechanisms involved in the inter cellular and intra cellular processes. With the purpose of to optimize the growth and development of the neuromuscular unions, the cells were cultivated on two surfaces that have shown to be adapted in other types of cultures. We used the neuroblastoma cell line NG108-15 and myoblast cell line C2C12, these were selected on the basis of specialized literature. The lines cells were cultured by separated on dishes culture and material, both cellular lines under suitable conditions for their growth and proliferation were cultivated, We applicated electrophysiology techniques in both cellular types like the one voltaje clamp for the measurement of the ion currents and of intracellular registry for the measurement of the membrane potential. Later they settled down we applicated the necessary conditions of culture for the growth in a same atmosphere (co culture), they were seeded in boxes of culture and on material covered with polypyrrol synthesized by plasma polymerisation. In order to both corroborate the presence of cellular types in the co cellular culture, specific antibodies for proteins were applied to inmunocytochemical techniques, using and acquiring images with fluorescence microscopy. Techniques of cellular electrophysiology were applied, as voltage clamp and current clamp registry of both cellular types on boxes of culture and the material covered with polypyrrol, to verify the electrical functionality of the cells. In conclusion, we have the formation of neuromuscular cellular co culture in two surfaces, which it will allow to study the mechanisms involved in the function of the neuromuscular junction.
El objetivo de este trabajo es implementar un modelo de unión neuromuscular para el estudio de los mecanismos involucrados en los procesos intra e intercelulares empleando co cultivos celulares. Con el fin de optimizar el crecimiento y desarrollo de las uniones neuromusculares, las células se cultivaron sobre dos superficies que han mostrado ser adecuadas en otros tipos de cultivos. Las líneas celulares que se emplearon fueron la línea de neuroblastoma NG108-15 y la línea muscular (mioblasto) C2C12, éstas fueron seleccionadas ya que se consideran modelos de motoneuronas y de células musculares esqueléticas respectivamente. Se cultivaron por separado ambas líneas celulares bajo condiciones idóneas para su crecimiento y proliferación sobre cajas de cultivo convencionales y sobre material recubierto con polipirrol sintetizado por polimerización en plasma. Las células se evaluaron de acuerdo a su morfología y características electrofisiológicas. Se aplicaron técnicas electrofisiológicas en ambos tipos celulares, como la de fijación de voltaje para la medición de las corrientes iónicas y de registro intracelular para la medición del potencial de membrana. Posteriormente se establecieron las condiciones de cultivo necesarias para el crecimiento de ambas líneas celulares en un mismo ambiente (co cultivo). Se sembraron en cajas de cultivo y sobre material recubierto con polipirrol. Para corroborar la presencia de los dos tipos celulares en el co cultivo, se aplicaron técnicas de inmunocitoquímica, utilizando anticuerpos específicos para la marcación de proteínas localizadas en lo cuerpos neuronales y adquiriendo imágenes con microscopía de fluorescencia. Se concluye que se obtuvo la formación de uniones neuromusculares en co cultivo en las dos superficies empleadas, que permitirá estudiar los mecanismos involucrados en la función de la unión neuromuscular.
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